這次講解堿裂解法，從大腸桿菌中抽提質粒的基本原理。

我們將搖菌得到的混合物離心，去除培養(yǎng)基，就可以獲得大腸桿菌，加入溶液1重懸。溶液1含緩沖成分，和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2，含NaOH和SDS。在強堿環(huán)境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，釋放出基因組DNA和質粒DNA。此時基因組DNA雙螺旋結構被破壞，發(fā)生變性。質粒DNA也會發(fā)生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，并緊密的結合在一起。

當加入溶液3（含醋酸鉀溶液）使pH恢復中性時，共價閉合環(huán)狀質粒DNA復性快，而線性的染色體DNA復性緩慢，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復合物，被十二烷基硫酸鹽包蓋，從溶液中有效地沉淀下來。經過離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復性的質粒DNA。

質粒抽提試劑盒中，通常還有 DNA吸附柱，將質粒DNA吸附，其他的雜質被洗去。最后用洗脫液，將質粒DNA洗脫下來。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)