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    免疫細胞轉(zhuǎn)染實驗失敗了千萬不要慌!

    發(fā)布時間: 2022-11-03  點擊次數(shù): 1169次
       免疫細胞轉(zhuǎn)染在細胞生物學和分子生物學中占據(jù)重要地位,廣泛用于基因與蛋白功能研究,成為實驗室工作中的常規(guī)技術(shù)手段之一。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,需要根據(jù)細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應具有高轉(zhuǎn)染效率,低細胞毒性和對正常生理學的影響最小,并且易于使用和具有可重復性等特點。常用于哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。
      然而,免疫細胞轉(zhuǎn)染實驗出現(xiàn)失敗也不要驚訝,常見的異常結(jié)果是細胞大量死亡、轉(zhuǎn)染效率不高、重復實驗不穩(wěn)定。如何找到問題所在,讓實驗順利進行,就顯得比較重要。例如細胞轉(zhuǎn)染實驗失敗導致細胞大量死亡如何處理我們根據(jù)以下的分析來針對性解決:
      1.細胞狀態(tài)不佳:選擇生長旺盛的細胞進行轉(zhuǎn)染實驗。
      2.核酸純度不夠或內(nèi)毒素過高:采用高質(zhì)量核酸與去內(nèi)毒素的核酸。
      3.目的蛋白對細胞的毒性:嘗試進行再設(shè)計。
      4.轉(zhuǎn)染試劑過多:降低轉(zhuǎn)染試劑的量;轉(zhuǎn)染后4-6h換液。
      5.污染:排查污染源或重新復蘇細胞。
      6.抗生素存在:特別是陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞,降低細胞的活性,導致轉(zhuǎn)染效率降低,可降低抗生素濃度或不使用抗生素。
      7.營養(yǎng)不足:如果無血清條件下轉(zhuǎn)染的,要根據(jù)狀態(tài)及時補充營養(yǎng)。
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